Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现家兔自身HIV到再次出现1改型乳癌外科副作用的的的发展所部在学龄前初就有很好的描述，多个家兔自身HIVHIV的学龄前中都有70%在血清转换后10年内入院乳癌，而随访15年的学龄前这一%上升到84%。相对于之下，九成外科1改型乳癌一半以上的改型1改型乳癌的得病组态还从未想得到充分的研究工作。

越来越多的人开始用作分期系统来定义1改型乳癌的的的发展：母体在再次出现多种家兔自身HIV时转到第1先决条件，再次出现体温异常时转到第2先决条件，再次出现副作用时转到第3先决条件。一些多发家兔自身HIVHIV的母体，在1期和2期，的的发展较慢，并的发展为得病的1改型乳癌。我们之前描述了一四组在首次检测到多种家兔自身HIV样本后至少10年无乳癌的近于慢的的发展者，这四组病患总数少，但构造非常完全一致。随后，我们推测家兔自身上皮细胞甲基化CD8+T细胞核质子化在的的发展很慢的病患中都基本不长期存在，但在早先得病和长期长期存在的乳癌病患中都很更易检测到。这可能会暗示，与的的发展病患相对于，这些病患自身免疫细胞的闭环增强。

晚期研究工作暗示，尽管闭环性T细胞核(Treg)数量正常，但乳癌病患长期存在一些机能缺陷，其中都还包括对IL-2的质子化潜能减小。此外，乳癌病患中都的波动CD4+T细胞核可能会对闭环更具抵抗性，发挥为波动T细胞核的依赖性减慢，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及上皮细胞历程的CD4+T细胞核中都IL-2质子化减慢。本研究工作的目的是描述了CD4+闭环性T细胞核(Treg)在海岸边近于很慢的的发展者中都的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

工具：BOX研究工作是一项以这群人蓝本的纵向研究工作，在21岁表列出确诊的病患亲友中都检查1改型乳癌的可怕因素。我们之前描述了长期很慢的的发展者的构造，他们持续保持多重家兔自身HIVHIV超过10年，但从未再次出现乳癌的外科副作用，慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续持续保持无乳癌并愿意提供大量血液样本的很慢的的发展者划定T和B细胞核机能量化。在迄今为止的研究工作中都，8名慢的的发展者(SP四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的家兔自身HIVHIV。所有的与会者都东南面1改型乳癌的的发展的1期，尽管一些人随后得不到了家兔自身HIV对某些上皮细胞的HIV质子化，然而，一名病患已经东南面2期至少6年，但从未再次出现外科副作用，一名病患被检验为乳癌，该人会72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中都对该ADP开展了实质上评估。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核奥义和T细胞核依赖性试验评估ADP中都Treg的频谱、变异和机能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无监督聚类量化，评估Treg变异。

结果：与心理健康ADP相对于，来自慢的的发展体的遗忘CD4+T细胞核的监督聚类结果显示，激来时的遗忘CD4+ Treg频谱上升，与抑制作用诱导的TNFR相关蛋白(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c急剧下降的病患与的的发展很慢者和比如说的依此四组相对于，Treg谱有所不尽相同。机能推断，与心理健康ADP相对于，来自很慢的的发展体的Treg酪氨酸的CD4+波动T细胞核依赖性引人注意受损。发挥为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的依赖性上升。

示意图1 深入的变异量化结果显示，CD4+Treg亚改型在慢的的发展函数调用中都上升。由FlowSOM转化成的Treg三楼，聚集在来自所有ADP的来时CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物隐含鉴定出10个元簇:遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个不尽相同Treg标识转化成的10个元簇的MST。每个节点都是一个坦克部队(100个坦克部队)，更多的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点四组周围上色。每个节点中都的饼示意图对此单个标识的隐含行政级别。(b)每个元聚类的热示意图，以结果显示整体标识隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化成示意图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的大块。(e-l)相对于重元素为每个metacluster箱该线示意图(重元素> 0.05%)完全一致为HD和SP四组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核(l)。深粉色左上角都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模改型证实，Treg频谱的上升是的的发展很慢的标记。分级暂时性(a - f)和玉米量化(g-k)比较SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的都是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展分离，实时FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(杂色)四组以及ADPSP 606(深粉色)中都CD25+ cd127的频谱简介示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性兄集的箱该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度图例，箭头厚实的簇被鉴别为SP和HD函数调用相互间的不尽相同。(j)箱该线示意图结果显示了在SP(杂色)和HD(灰点)四组中都，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于重元素(%)。(k)直方示意图结果显示每个簇的变异(粉色)和Treg标识相对于隐含与取材隐含(粉色);上列，寄存器Treg_3;下面动身，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇中都标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

示意图3 与心理健康献血者相对于，的的发展很慢者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T细胞核元簇(遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标识的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中都所有HD(紫色)、所有SP(粉色)和SP 606(深粉色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方示意图(c)和简介示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(深粉色)所有ADP还包括，p< 0.05(粉色)ADPSP 606和比如说的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从分级暂时性，从所有HD(紫色)、所有SP(粉色)和SP 606(深粉色)串联，结果显示直方示意图(e)和简介示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

示意图4 来自很慢的的发展的CD4+ treg细胞核控制波动CD4+T细胞核的潜能减小。SP四组用粉色的该线和左上角对此，HD四组用紫色的该线和左上角对此，深粉色的该线/左上角对此ADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按检视的%指示剂。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培育出3天后开展流式细胞核奥义检测。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应的treg培育出(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育出。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE依赖性比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比例。用作HIV依此(激来时的鼓动细胞核另有treg)数值依赖性比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 波动CD4+T细胞核对很慢的的发展的T细胞核来时化的依赖性更脆弱。SP四组用粉色的该线和左上角对此，HD四组用紫色的该线和左上角对此，深粉色的该线/左上角对此ADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按检视的%指示剂。用抗CD3 /28微珠来时化细胞核，培育出3天后开展流式细胞核奥义(CD25反染)和甲基化量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育出。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE依赖性百分所部(b)。(c,d) CD25依赖性百分所部(c)和CD134依赖性百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们结论的论据是，来自很慢的的发展兄的来时化遗忘CD4+Treg在GITR隐含中都想得到了延展和比较丰富，强调了进一步研究工作Treg在1改型乳癌可怕性母体中都的异质性的实质。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28